選擇PCR擴增儀應結(jié)合其工作原理
瀏覽次數(shù):533發(fā)布日期:2022-01-05
PCR擴增儀是分子診斷實驗室的重要工具,直接影響臨床檢測結(jié)果的準確性、重復性、甚至工作效率。PCR儀器的選擇是實驗室質(zhì)量保證的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
依據(jù)PCR擴增儀工作原理選擇機型:
1、熱模塊:
由于PCR儀器為96個樣本同時進行擴增和檢測,每個檢測孔的溫控*一致是理想狀態(tài)。不同PCR儀器的升降溫原理不同,如壓縮機、半導體或空氣傳導,升降溫速度差異較大。臨床檢測不單單有質(zhì)量要求,有時容不得報告的拖延,因此選擇整體加熱模塊和故障率的儀器,也是提升實驗室質(zhì)量的因素之一。
2、光學模塊:
PCR擴增信號的采集,是熒光PCR儀器定量的靈魂,決定了96個樣本孔間信號采集的均一性。從擴增管上部采集熒光信號的方式,由于經(jīng)過管蓋和空氣部分,容易導致熒光信號衰減或折射,不同核酸濃度的擴增效率易產(chǎn)生差異,而側(cè)面采集熒光信號儀器,則能有效避免上部熒光采集存在的缺陷,獲得顏值較高的擴增曲線。
3、軟件系統(tǒng)
計算機對每個擴增熒光信號進行擬合,依據(jù)標準曲線得出檢測樣本的結(jié)果,分析基線的設置原則以擴增曲線熒光值的5%為準,這恰好是PCR擴增儀容易產(chǎn)生噪音的位置,因此軟件具有依據(jù)整體擴增趨勢進行優(yōu)化的功能顯得尤為重要,從而使獲得的熒光曲線趨于光滑,而得出重復性較好的結(jié)果。